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🌻SP SVT-Flyer-La PCR
02/02/2022
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Notre expérience, jotre processus MATÉRIEL : - 1 thermocycleur -1 tube d'échantillon d'ADN à tester -1 tube d'amorce - 1 tube contenant les nucleotides et l'ADN polymerase -1 microtube -1 micropipette de 20 μL -1 micropipette de 4 μL - 3 cônes stériles - des gants - des feutres à - des blouses pointes fines Le génome du SARS-CoV-2 est compose d'ARN. Comme tel, il n'est pas amplifiable. I doit donc, dans un premier temps être transforme en ADN. ARN = Acide ADN Acide DésoxyriboNucleotique wwwx RiboNucléique Schematison de I'ADN et de l'ARN Prélevement nasopharynge Solution d'ARN contenant, entre autres, l'ARN du génome viral Puis nous avons répété ce processus avec la solution , ensuite nous avons prélevé 4 μL de solution , puis placé le tout dans notre microtube. thermocycleur Virus du SRAS-COV-2 Purification de I'ARN (machine à réplication) notre echantito nereo cellule infectée Nous avons préleve 20 μL de la solution et placer dans notre microtube OBJECTIF Notre objectif est de réaliser une amplification d' un fragment d'ADN pour que celui-ci Soit identifiable lors de l'électrophorèse. On utilise donc un genome viral Z rr Nous mettons ensuite notre microtube dans le thermocycleur après avoir inscrit nos initiales. Notre échantillon subit 12 replications, 12 cycles PCR. Nous voulons denaturer l'ADN donc séparer 2 brins. Pour cela nous chauffons notre échantillon pendant 5 minutes à 95 degres Puis nous finissons de dénaturer pendant 5 secondes. I s'en suit I' Hybridation et la Polymérisation (ajout de nucleotides). ↓ les brins complementaires d'ADN sont Synthetises Pour finir, il y a la phase de terminaison * la matrice est réalisée liquide TDE Senrou qui réenroule I'ADN Thum RÉSULTAT La technique d'électrophorèse permet de visualiser des fragments d'ADN en les faisant migrer dans un gel d'agarose soumis à un champ électrique cables permettant l'électrification du champ Electrique Suivi de l'amplification se déroulant dans le thermocycleur ilustration manipulation Nous avons déposer 10...
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μL d'ADN dans un puit à l'aide de la micropipette Puis nous avons poser le couvercle et mit en marche I'alimentation (100 v) Après avoir effectué le processus qui suit l'électrophorèse. Nous pouvons observer nos resultats. est L'ADN chargée négativement plus légère donc va ligrer plus loin. 1 dénaturation image! séparation des deux brins d'ADN Température (°C) 2 hybridation petits morceaux How fixation des amorces. pats morceaux ADN permettant l'accrochage des polymerases un cycle: de l'ordre d'une minute 3 elongation E www les polymerases fabriquent les brins d'ADN complémentaires des brins matrices -------- 2º cycle 3* cycle 4* cycle Temps Représentation schématique simplifiée des operations se déroulant pendant la PCR. le premier Cycle est dēt aille) (seul FLYER FAIT PAR FLAVIE ROUSSEAU & JEANNE CLOAREC La PCR QU'EST CE QUE C'EST ? Polymerase Chain Reaction = PCR La PCR est une technique d'amplification de l'ADN imaginée par Kary Mullis en 1985 et qui rend possible l'analyse de I'ADN à partir de très faibles quantites prélevées comme un cheveu " une trace de salive, un reste d'humain fossilisé... en On peut effet obtenir un million de copie d'ADN en moins d'une heure. Cela a boulverse la biologie moléculaire et s'est impose dans tous les laboratoires. ↑ Processus Naso - pharynges