Le dosage spectrophotométrique par étalonnage, également appelé dosage par étalonnage, repose sur la loi de Beer-Lambert. Cette méthode permet de mesurer la concentration d'une espèce dissoute dans une solution en utilisant la relation entre l'absorbance et la concentration.
Loi de Beer-Lambert
La loi de Beer-Lambert établit une proportionnalité entre l'absorbance A et la concentration c de l'espèce considérée. Cette relation est formulée par la formule A = ε * l * c, où A représente l'absorbance, ε le coefficient d'extension molaire en L.mol⁻¹.cm⁻¹, l la largeur de la solution en cm, et c la concentration en mol.L⁻¹. Cette formule permet de déterminer la concentration d'une espèce en solution en mesurant son absorbance à une longueur d'onde spécifique.
Spectrophotomètre et absorbance
Pour mesurer l'absorbance d'une solution, on utilise un spectrophotomètre, un instrument présent dans de nombreux laboratoires de biochimie. Le spectromètre permet de tracer la courbe A = f(x), également appelé spectre d'absorption, qui indique la relation entre l'absorbance et la longueur d'onde. Il est ainsi possible de déterminer la longueur d'onde maximale Amax et l'absorbance maximale Amax correspondant à la couleur complémentaire de la solution.
Protocole de dosage par étalonnage
Pour réaliser un dosage par étalonnage spectrophotométrique, il est nécessaire de trouver le coefficient directeur de la droite représentant la relation entre l'absorbance et la concentration. Ce coefficient d'extension molaire, noté ε, peut être déterminé en mesurant l'absorbance de solutions de concentrations connues. En traçant la courbe absorbance en fonction de la concentration, il est possible de déterminer ce coefficient directeur, et ainsi de réaliser des dosages précis par la suite.
Utilisation du spectrophotomètre
L'utilisation d'un spectrophotomètre en biochimie est indispensable pour réaliser des dosages spectrophotométriques par étalonnage. Cet instrument permet de mesurer l'absorbance d'une solution à des longueurs d'onde spécifiques, et ainsi de déterminer la concentration des espèces présentes. Il est donc primordial de savoir utiliser cet équipement de laboratoire de manière précise et conforme aux protocoles établis.
En conclusion, le dosage spectrophotométrique par étalonnage repose sur la loi de Beer-Lambert, et nécessite l'utilisation d'un spectrophotomètre. Cette méthode de dosage permet d'obtenir des résultats précis et fiables sur la concentration des espèces dissoutes dans une solution, en utilisant la relation entre l'absorbance et la concentration selon la loi de Beer-Lambert.
