Calcul de la concentration biologique

Le calcul de la concentration biologique est une étape cruciale dans le dénombrement des bactéries. Cette section détaille la méthode de calcul et les considérations importantes pour obtenir des résultats précis.

La formule de calcul UFC/ml pour le dénombrement des levures sur milieu Sabouraud et Chloramphénicol est la suivante :

Highlight: N germes = (n₁ + 0,1 x n₂) / (V x d)

Où :

• N germes représente le nombre de germes par ml
• n₁ est le nombre de colonies sur la première boîte
• n₂ est le nombre de colonies sur la deuxième boîte
• V est le volume d'inoculum utilisé
• d est le facteur de dilution

Il est important de sélectionner la dilution où le nombre de colonies est le plus élevé, tout en s'assurant que les colonies sont similaires. En cas de valeurs anormales, il faut les éliminer.

Example: Si aucune boîte n'est dénombrable car elle contient trop de colonies, on conclut qu'il y a plus de 1,5 x 10⁶ UFC de levures par ml. À l'inverse, si aucune boîte ne contient de colonies, on conclut qu'il y a moins de 5,0 x 10² UFC de levures par ml.

Pour les milieux qui ne sont pas suffisamment sélectifs, il peut être nécessaire d'identifier les germes des colonies suspectes. Dans ce cas, on réalise une identification sur un nombre de colonies égal à la racine carrée du nombre total de colonies suspectes.

Vocabulary: Identification : processus permettant de déterminer l'espèce ou le genre d'un microorganisme isolé.

Cette méthode de dénombrement des bactéries par dilution permet d'obtenir une estimation précise de la concentration microbienne dans l'échantillon original, ce qui est essentiel pour de nombreuses applications en microbiologie, de la sécurité alimentaire à la recherche médicale.

Dénombrement en milieu solide

Le dénombrement des bactéries sur milieu solide est une technique fondamentale en microbiologie. Cette méthode permet de quantifier les microorganismes présents dans un échantillon en les cultivant sur un milieu nutritif solide.

Définition: Le dénombrement en surface est une technique utilisée lorsque la norme de référence est inférieure à 100 ml. Elle consiste à étaler l'échantillon à la surface du milieu gélosé.

Le dénombrement en masse, quant à lui, nécessite un volume d'inoculation de 1 ml par boîte et par dilution, en commençant par la dilution la plus élevée. Le milieu gélosé doit être en surfusion, mais pas trop chaud pour ne pas tuer les microorganismes. On peut utiliser une double couche pour éviter l'envahissement.

Highlight: Il est crucial d'incuber les cultures dans des conditions optimales pour assurer une croissance adéquate des microorganismes.

La lecture des résultats se fait en Unités Formant Colonies (UFC). Le comptage commence par les boîtes les plus diluées pour éviter de compter trop de colonies.

Vocabulary: UFC - Unité Formant Colonie, représente une colonie visible issue d'une seule cellule microbienne ou d'un agrégat de cellules.

Des règles spécifiques s'appliquent pour le comptage :

• Pour les procaryotes sur milieux non sélectifs : compter les boîtes contenant entre 15 et 300 colonies
• Pour les procaryotes sur milieux sélectifs : compter les boîtes contenant entre 5 et 50 colonies
• Pour les eucaryotes sur milieux sélectifs ou non : compter les boîtes contenant entre 10 et 150 colonies

Example: Pour un dénombrement en surface, on utilise une pipette graduée de 1 ml ou une pipette Pasteur, avec un volume minimal de 0,1 ml et maximal de 0,4 ml.